實時熒光PCR試劑盒使用注意事項

　　實時熒光PCR試劑盒該染料與雙鏈DNA結合后，能夠產生強度高于SYBR Greenl的熒光。結合了以下諸多優勢：熱啟動酶、優化的緩沖液、*熒光染料，可有效地提高mRNA表達水平檢測的可靠性、重復性和靈敏度。qPCRmix為即用型的2x預混母液，該混合母液經過處理，穩定性高，主要包含：雙鏈DNA結合染料、熱啟動酶、MgCl2、dNTPs、反應緩沖液，可確保產生實時定量PCR結果。

　　實時熒光PCR試劑盒使用注意事項：

　　1.保存

　　未拆封的試劑盒，請于-20℃保存；拆封之后，應在4℃保存。在試劑消耗量較少的實驗室，可以考慮將試劑盒的按照組分單獨分裝，后保存在-20℃。

　　2.配置

　　試劑盒內所含各組份都是混合物，在靜置情況下會發生分層現象，因此，試劑盒現配現用，震蕩混勻，避免反復凍融，避免預混。其中，反復凍融將大幅縮短試劑盒使用壽命。在擴增體系的選擇時，盡量選擇標準體系，再根據檢材情況加入模板，之后切勿忘記以PCR用水補足擴增體系。

　　3.切勿預混因試劑盒中酶的活性較高，將各組份按照比例混合之后，即使沒有達到它的合適溫度，但也可能發生與引物結合，導致實驗結果出現丟位點或者雜合子純化等情況。

　　4.陰陽性參照

　　實驗結果會受提取、擴增和電泳等多個環節的影響，因此，每次擴增實驗都應該添加一組陰陽性參照。這樣，當結果異常的時，我們就可以結合陰陽性參照的表現，排查問題出在哪個環節。

　　實時熒光PCR試劑盒特點：

　　1.高靈敏度：可定量檢測低拷貝靶基因。

　　2.穩定性增強。

　　3.靈敏度更高，Ct值更小，對PCR反應具有更小的抑制作用。

　　4.熱啟動酶性能強勁、可靠。