PCR擴(kuò)增試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù)

　　PCR擴(kuò)增試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù)：在常溫恒溫下，特殊修飾的反轉(zhuǎn)錄酶利用特異性引物DNA和模板RNA合成cDNA鏈，反應(yīng)體系中的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA鏈為模板進(jìn)行快速核酸擴(kuò)增反應(yīng)。本試劑盒在42?C下，依賴核酸外切酶的作用，加入根據(jù)模版設(shè)計(jì)的特異的分子探針，使用熒光監(jiān)測(cè)設(shè)備能實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)片段擴(kuò)增過(guò)程的實(shí)時(shí)監(jiān)控。適用于實(shí)驗(yàn)室級(jí)別的RNA擴(kuò)增以及其他檢測(cè)用途的RNA擴(kuò)增使用。
 

　　PCR擴(kuò)增試劑盒操作需要提前30分鐘將試劑盒所需組分取出，室溫融化，震蕩混勻。
 

　　1)每個(gè)干粉反應(yīng)管加入29.4μLAbuffer(注意：Abuffer需融化混勻，否則會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)效果產(chǎn)生影響)；
 

　　2)每個(gè)反應(yīng)管分別加入2μL上游引物、2μL下游引物和0.6μL探針(引物和探針濃度為10μM，對(duì)于多個(gè)反應(yīng)、步驟1和步驟2可以混合后再分裝至反應(yīng)管中)；
 

　　3)向反應(yīng)管中依次加入11.5μLddH2O和2μL核酸模板(可根據(jù)核酸濃度調(diào)整加入的核酸模板體積，并相應(yīng)調(diào)整加入的ddH2O體積，至模板與ddH2O總體積為13.5μL)；
 

　　4)向反應(yīng)管中加入2.5μLBbuffer并充分混合(對(duì)于多個(gè)反應(yīng)，建議將Bbuffer加至反應(yīng)管的蓋子內(nèi)側(cè)，上下顛倒反應(yīng)管8-10次混勻)；
 

　　5)混勻后，將反應(yīng)液甩(或快速離心)至管子底部，然后立即將反應(yīng)管放入熒光檢測(cè)設(shè)備中。熒光檢測(cè)程序設(shè)置為：恒溫42C；每30s采集一次FAM通道(信號(hào)采集通道的選擇與熒光探針設(shè)計(jì)一致)熒光值；反應(yīng)時(shí)間20mins。