關(guān)于PCR擴(kuò)增試劑盒您了解多少？

　　PCR擴(kuò)增試劑盒在血樣DNA中的檢驗(yàn)及對(duì)比結(jié)果。方法抽取320例血樣DNA作為檢測(cè)對(duì)象，并應(yīng)用不同PCR擴(kuò)增試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，在此基礎(chǔ)上，結(jié)合所得的血樣檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析比較。結(jié)果經(jīng)研究，在樣本相同的情況下，血樣檢驗(yàn)差異率為1.25%(4/320)。而且經(jīng)檢測(cè)，4例出現(xiàn)不同檢驗(yàn)分型的樣本均存在等位基因缺失。另外，Profiler PlusTM擴(kuò)增不平衡發(fā)生率為0.9375%，IdentifilerTM擴(kuò)增不平衡發(fā)生率為0.3125%，Powerplex16HS擴(kuò)增不平衡發(fā)生率為0.3125%。結(jié)論在血樣DNA的檢驗(yàn)過程中，通過應(yīng)用不同PCR擴(kuò)增試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，能夠準(zhǔn)確獲取到不同位置的異常基因，減少基因缺失、擴(kuò)增不平衡所帶來的誤差影響，具有較高的推廣價(jià)值。
 

　　PCR擴(kuò)增試劑盒注意事項(xiàng)：
 

　　1.Pfu擴(kuò)增效率通常比Taq酶差，這是由于Pfu具有3'-5的外切酶活性(高保真性)所引起的，不是由于Pfu酶的質(zhì)量不穩(wěn)定所致。Pfu擴(kuò)增1.5kb以下的DNA片段和Taq沒有多大差別。
 

　　2.10xPfu PCR Buffer中已含有Mg+，用該緩沖能保證擴(kuò)增產(chǎn)物的保真性。提高反應(yīng)體系的pH和Mgt濃度能部分提高DNA擴(kuò)增的產(chǎn)率，但產(chǎn)物的保真性將有所下降。
 

　　3.用Pfu擴(kuò)增時(shí)，引物的純度要求較高，長(zhǎng)度要求大于18bp，Tm在55-80℃之間。引物的濃度在0.1-0.5uM之間，比Taq略高。Pfu具有33-5的外切酶活性可能會(huì)降解引物，特別是溶液中沒有dNTP的情況下。所以，Pfu必須是最后加入到反應(yīng)體系中，并立即進(jìn)行PCR反應(yīng)。
 

　　4.Pfu的熱穩(wěn)定性比Taq酶高，對(duì)于GC含量很高的模板，變性溫度可以提高到98℃，而不會(huì)影響Pfu的活性。
 

　　5.PCR產(chǎn)物為平端，不能直接用T/A克隆方式克隆。需要加A后才能進(jìn)行克隆。